1.費氏弧菌發光桿菌工藝流程
保藏菌種一菌種活化→三角瓶種子→一級種子液→發酵培養基配料混合→培養基滅菌→冷卻→接種→發酵床通風培養→費氏弧菌發光桿菌固態發酵產物
2.種子液的制備
(1)斜面菌種活化將費氏弧菌發光桿菌的保藏菌種在試管斜面培養基上劃線接種,于37℃培養18~20 h,使費氏弧菌發光桿菌活化;試管斜面培養基可用牛肉膏蛋白胨培養基。
(2)三角瓶種子制備將活化的費氏弧菌發光桿菌斜面菌種接種到裝有費氏弧菌發光桿菌液體培養基三角瓶中,于35~37℃,180~200 r/min,搖床18~20 h,得到費氏弧菌發光桿菌三角瓶種子液;費氏弧菌發光桿菌液體培養基可用牛肉膏蛋白胨液體培養基。
(3)一級種子液先按照后述的配方配制一級種子液體培養基,pH 7.0~7.2,經121℃,滅菌30 min,冷卻到37℃,然后將得到的費氏弧菌發光桿菌三角瓶種子液以0.3 9/6~O.5 9/5的接種量接種于所用的一級種子罐中,于37℃培養24 h得到費氏弧菌發光桿菌的一級種子液;所述的一級種子液體培養基配方為:豆粘30 g/L、紅糖5 g/L、淀粉2.5 g/L、MgSO4 0.5 g/L、MnSO4 1.5 g/L、K2HPO4 2 g/L、KH2 P041.5 g/L、CaCO30.1 g/L,調節pH 7.0。
3.發酵床淺盤培養
(1)發酵床結構 長度5.5~8.0 m,寬度1.5~2.5 m,高度O.5~0.6 m。
(2)發酵培養基的配制和滅菌發酵培養基采用麩皮稻殼培養基,麩皮和稻殼按5:1(質量比)混合,再按1:(1.2~1.3)的料水比加入水混合均勻,不能有大的結塊,以免滅菌不*。混合均勻后的培養基放入旋轉蒸煮鍋滅菌60~90 min。
(3)接種將獲得的費氏弧菌發光桿菌一級種子液以10%~15%的接種量接種于經滅菌降溫至40~50℃的費氏弧菌發光桿菌固體培養基中,料菌均勻后堆積1~2 h,上發酵床攤平,厚度30~35 cm。
(4)費氏弧菌發光桿菌發酵過程控制整個發酵過程分兩個階段,*階段(1~22 h):1~10 h靜止期,10 h后間斷通風控制溫度在37℃,20 h左右*次翻曲;第二階段(23~40 h):28~30 h第二次翻曲,控制溫度在37℃,直至發酵結束。發酵期間定時鏡檢,當芽孢率達到80%以上停止發酵,60℃低溫烘干。
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