費氏弧菌發光桿菌沙土保藏法操作步驟:
(1)取河沙加入10%稀鹽酸,加熱煮沸30分鐘,以去除其中的有機質。
(2)倒去酸水,用自來水沖洗至中性。
(3)烘干,用40目篩子過篩,以去掉粗顆粒,備用。
(4)另取非耕作層的不含腐植質的瘦黃土或紅土,加自來水浸泡洗滌數次,直至中性。
(5)烘干,碾碎,通過100目篩子過篩,以去除粗顆粒。
(6)按一份黃土、三份沙的比例(或根據需要而用其他比例,甚至可全部用沙或全部用土)摻合均勻,裝入10×100mm的小試管或安瓿管中,每管裝1g左右,塞上棉塞,進行滅菌,烘干。
(7)抽樣進行無菌檢查,每10支沙土管抽一支,將沙土倒入肉湯培養基中,37℃培養48小時,若仍有雜菌,則需全部重新滅菌,再作無菌試驗,直至證明無菌,方可備用。
(8)選擇培養成熟的(一般指孢子層生長豐滿的,營養細胞用此法效果不好)優良費氏弧菌發光桿菌菌種,以無菌水洗下,制成孢子懸液。
(9)于每支沙土管中加入約0.5ml(一般以剛剛使沙土潤濕為宜)孢子懸液,以接種針拌勻。
(10)放入真空干燥器內,用真空泵抽干水分,抽干時間越短越好,務使在12小時內抽干。
(11)每10支抽取一支,用接種環取出少數沙粒,接種于斜面培養基上,進行培養,觀察生長情況和有無雜菌生長,如出現雜菌或菌落數很少或根本不長,則說明制作的沙土管有問題,尚須進一步抽樣檢查。
(12)若經檢查沒有問題,用火焰熔封管口,放冰箱或室內干燥處保存。每半年檢查一次活力和雜菌情況。
(13)需要使用費氏弧菌發光桿菌菌種,復活培養時,取沙土少許移入液體培養基內,置溫箱中培養。
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