胰島素elisa檢測試劑盒采用雙抗體夾心法檢測豬圓環(huán)II型病毒CAP蛋白抗原。其基本原理如下:用一株特異性單克隆抗體制備包被微孔板,另外一株特異性單克隆抗體制備HRP酶標(biāo)記物。當(dāng)標(biāo)本中含有相應(yīng)的抗原時(shí),會(huì)形成抗體-抗原-抗體-酶的復(fù)合物。未結(jié)合的物質(zhì)通過洗滌去除。加入顯色底物顯色,通過測量顏色的變化來判斷標(biāo)本中抗原的濃度。
胰島素elisa檢測試劑盒的試劑準(zhǔn)備:
1). 測試前將試劑盒組份置于室溫(18-25℃)平衡30分鐘,測試后應(yīng)立即放回2-8℃保存。
2). 洗滌液:將25ml濃縮洗滌液倒入475ml的蒸餾水中,混勻即可。
3). 病料處理方法:稱病料1克,加入1-2毫升的樣品稀釋液,再用5-10克的石英砂研磨充分(5-10分鐘),靜置3小時(shí),3000轉(zhuǎn)離心10-15分鐘,取上清用于檢測。
注2:需用試劑盒提供的樣品稀釋液,不得使用PBS等緩沖液。
4). 油性疫苗:取1毫升油性疫苗,然后加入0.1毫升的分析純正戊醇,充分震蕩1分鐘,將該瓶溶液放入2-8度冰箱,靜置30分鐘,可見油、水分離。用吸管或是移液器吸出下層水相用于檢測。水性佐劑的疫苗可直接檢測,必要時(shí)需要用試劑盒配套的稀釋液稀釋。
注3:如需稀釋,請(qǐng)用胰島素elisa檢測試劑盒提供的樣品稀釋液,不得使用PBS等緩沖液。
5). 如需定量檢測,建議對(duì)標(biāo)本用試劑盒中的樣品稀釋液進(jìn)行系列稀釋,以便計(jì)算平均值。此時(shí)需用標(biāo)準(zhǔn)品制備標(biāo)準(zhǔn)曲線,可選擇3-5份測值近似的樣品(比如蔗糖密度梯度離心法定值樣品)等比例混合后以理論濃度作為標(biāo)準(zhǔn)品濃度使用。