雙抗原夾心法的反應(yīng)模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶結(jié)合物,以檢測相應(yīng)的抗體。與間接法測抗體的不同之處為以酶標(biāo)抗原代替酶標(biāo)抗抗體。此法中受檢標(biāo)本不需稀釋,可直接用于測定,因此其敏感度相對高于間接法。乙肝標(biāo)志物中抗HBs的檢測常采用本法。本法關(guān)鍵在于酶標(biāo)抗原的制備,應(yīng)根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)的不同,尋找合適的標(biāo)記方法。
小鼠載脂蛋白EELISA試劑盒的間接法:
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜。
2.次日洗滌3次。
3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,后一遍用DDW洗滌。
4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。
5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測O·D值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔O·D值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
單核細(xì)胞趨化蛋白3(MCP3)ELISA試劑盒
單核細(xì)胞趨化蛋白2(MCP2)ELISA試劑盒
單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP1)ELISA試劑盒
單核細(xì)胞巨噬細(xì)胞分化關(guān)聯(lián)蛋白(MMA)ELISA試劑盒
成釉細(xì)胞蛋白(AMBN)ELISA試劑盒
成纖維細(xì)胞生長因子受體樣蛋白1(FGFRL1)ELISA試劑盒
成纖維細(xì)胞生長因子受體4(FGFR4)ELISA試劑盒
成纖維細(xì)胞生長因子受體3(FGFR3)ELISA試劑盒
成纖維細(xì)胞生長因子受體2(FGFR2)ELISA試劑盒
成纖維細(xì)胞生長因子受體1(FGFR1)ELISA試劑盒
成纖維細(xì)胞生長因子7(FGF7)ELISA試劑盒
成纖維細(xì)胞生長因子5(FGF5)ELISA試劑盒
成纖維細(xì)胞生長因子3(FGF3)ELISA試劑盒
成纖維細(xì)胞生長因子21(FGF21)ELISA試劑盒
成纖維細(xì)胞生長因子19(FGF19)ELISA試劑盒
成纖維細(xì)胞生長因子18(FGF18)ELISA試劑盒
成纖維細(xì)胞生長因子17(FGF17)ELISA試劑盒
成纖維細(xì)胞生長因子13(FGF13)ELISA試劑盒
成纖維細(xì)胞生長因子12(FGF12)ELISA試劑盒
成纖維細(xì)胞生長因子11(FGF11)ELISA試劑盒
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