細胞色素試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯吸附試驗(ELISA)。往預先包被人細胞色素C(Cyt-C)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成黃色。顏色的深淺和樣品中的人細胞色素C(Cyt-C)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。
細胞色素試劑盒的使用方法:
1、樣品處理:
①液體食品:取約30m1樣品置于燒杯中,加熱除去酒精或二氧化碳,備用。
②固體食品:稱取搗碎的樣品約10克,置于燒杯中,加30m1水,搖勻后過濾,濾液備用。
2、測定:取一燒杯,加入處理后的樣品液10m1,加入檢測液A5滴,搖勻;用PH試紙沾取燒杯內的液體檢查PH值是否在8-9之間,如未到,再滴入檢測液A調整到PH值在8-9之間,然后加檢測試棉B少許,令其浸入液體中,在90-100℃的水浴中加熱,1分鐘后攪拌試棉并將液體中的檢測試棉B取出,用清水漂洗試棉,如試棉染上的顏色不褪的為非食用色素。為便于判斷,可取檢測試棉B少許,用水浸濕后對比觀察。
細胞色素試劑盒的注意事項:
1、試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2、濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3、各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
4、請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數后再測定,計算時請乘以總稀釋倍數。