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    首頁   >    新聞資訊   >   重組大腸桿菌目的蛋白的表達(dá)

    重組大腸桿菌目的蛋白的表達(dá)

    點擊次數(shù):971次  更新時間:2017-07-24

    一、費氏弧菌發(fā)光桿菌實驗流程

    二、實驗安排

    第1次 菌體超聲破壁、離心、包涵體復(fù)性、 裝離子交換柱

    第2次 測酶活、定蛋白離子交換層析 層析樣品進(jìn)行濃縮、透析

    第3次 濃縮、透析前、后樣品測活、定蛋白 裝分子篩柱

    第4次 分子篩層析,并對收集樣品進(jìn)行測活、定蛋白等

    第5次 對分離純化各樣品進(jìn)行蛋白電泳分析,并繪出分離純化表

    三、實驗操作

    第1次: 菌體超聲破壁、離心、包涵體復(fù)性、裝離子交換柱

    實驗順序:超聲破壁→離心→裝離子交換柱→平衡→包涵體復(fù)性

    掌握要點:破壁原理

    裝離子交換柱方法

    包涵體復(fù)性原理及方法

    第2 次:測酶活、定蛋白、 離子交換層析分析 、 層析樣品進(jìn)行濃縮、透析

    實驗順序:測酶活→上柱→梯度洗脫→定蛋白→紫外吸收測蛋白峰→酶活曲線測定→收集樣品→ 濃縮 →透析

    涉及單元實驗:測酶活、定蛋白、 離子交換層析、濃縮、透析

    掌握要點:堿性磷酸單酯酶測活原理

    紫外吸收法繪蛋白濃度曲線方法

    離子交換層析原理及方法

    濃縮及透析常用方法

    第3次:濃縮、透析前、后樣品測活、定蛋白、裝分子篩柱

    實驗順序:濃縮透析前、后樣品測活→考馬斯亮藍(lán)法定蛋白→裝分子篩柱→平衡

    涉及單元實驗:測活、定蛋白、裝分子篩柱

    掌握要點:考馬斯亮藍(lán)法測蛋白濃度方法

    費氏弧菌發(fā)光桿菌裝分子篩柱方法

    第4次:分子篩層析,并對收集樣品進(jìn)行分析

    實驗順序:測活樣品進(jìn)行分子篩層析→紫外吸收測蛋白峰--酶活曲線測定→考馬斯亮藍(lán)法定蛋白

    涉及單元實驗:破壁、離心、分子篩層析、復(fù)性

    掌握要點:分子篩層析原理

    對分離純化各樣品計算比活

    第5次:對分離純化各樣品進(jìn)行蛋白電泳分析, 并繪出分離純化表

    實驗順序:蛋白電泳,同時進(jìn)行數(shù)據(jù)分析

    涉及單元實驗:蛋白電泳

    掌握要點:掌握蛋白電泳方法

    了解分離純化樣品純度鑒定的各種方法

    繪制酶的分離純化表
    費氏弧菌發(fā)光桿菌

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