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    費氏弧菌發光桿菌轉化的操作步驟

    點擊次數:795次  更新時間:2017-09-27

    費氏弧菌發光桿菌轉化操作步驟
    (1)事先將恒溫水浴的溫度調到42℃。
    (2)從-70℃ 超低溫冰柜中取出一管(100μl)感受態菌,立即用手指加溫融化后插入冰上,冰浴5~10min。
    (3) 加入5μl連接好的質粒混合液(DNA含量不超過100ng),輕輕震蕩后放置冰上20min。
    (4) 輕輕搖勻后插入42℃水浴中1~2min進行熱休克,然后迅速放回冰中,靜置3~5min。
    (5) 在超凈工作臺中向上述各管中分別加入500μl LB培養基(不含抗菌素)輕輕混勻,然后固定到搖床的彈簧架上37℃震蕩1h.
    (6) 在超凈工作臺中取上述轉化混合液100~300μl,分別滴到含合適抗菌素的固體LB平板培養皿中,用酒精燈燒過的玻璃涂布棒涂布均勻(注意:玻璃涂布棒上的酒精熄滅后稍等片刻,待其冷卻后再涂)。
    (7) 如果載體和宿主菌適合藍白斑篩選的話,滴完菌液后再在平板上滴加40μl 2% X-gal,8μl 20% IPTG,用酒精燈燒過的玻璃涂布棒涂布均勻。
    (8) 在涂好的培養皿上做上標記,先放置在37℃恒溫培養箱中30-60min直到表面的液體都滲透到培養基里后,再倒置過來放入37℃恒溫培養箱過夜。
    (9) 在被費氏弧菌發光桿菌污染的桌面上噴灑70%乙醇,擦干桌面,寫實驗報告。
    (10)觀察平板上長出的菌落克隆,以菌落之間能互相分開為好。注意白色菌斑。
        含量:    進口/國產    去甲氧基姜黃素    20mg/支    英文名稱    Demethoxycurcumin    規格:
    雙去甲氧基姜黃素    含量:    進口/國產    雙去氧基姜黃素    20mg/支    英文名稱    Bisdemethoxycurcumin    規格:
    姜黃醇    含量:    進口/國產    莪術醇    20mg/支    英文名稱    Curcumol    規格:
    槲皮素-3-半乳糖苷    含量:    進口/國產    金絲桃苷    20mg/支    英文名稱    Hyperoside    規格:
        含量:    進口/國產    金絲桃素    20mg/支    英文名稱    Hypericin    規格:
        含量:    進口/國產    絞股藍皂苷    20mg/支    英文名稱    Stevenleaf    規格:
    扁桃苷    含量:    進口/國產    苦杏仁苷    20mg/支    英文名稱    Amygdalin    規格:
        含量:    進口/國產    苦參堿    20mg/支    英文名稱    Matrine    規格:
    費氏弧菌發光桿菌

     

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