參數規格:
產品名稱:改良安卡拉痘苗病毒PCR檢測試劑盒
英文名稱:Modified Vaccinia Virus Ankara (MVA)PCR
產品規格:50T
產品運輸:低溫運輸
產品保存:-20℃保存
產品有效期:一年
產品特點:
產品僅用于科研本產品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏熒光定量 PCR 產品。
?改良安卡拉痘苗病毒PCR檢測試劑盒原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經過n個熱循環擴增,擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
產品僅用于科研特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
PCR實驗步驟:
典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應組成一個循環,通過多次循環反應,使目的DNA得以迅速擴增。其主要步驟是:
將待擴增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復性溫度下分別與目的基因兩側的兩條單鏈互補結合,兩個引物在模板上結合的位置決定了擴增片段的長短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因為模板從5’→3’方向延伸,合成DNA的新互補鏈。
次亞磷酸鈉/二氫鈉/卑磷酸鈉/Sodium hypophosphiteAR,98%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,7681-53-0RT
偏硼酸鈉/四水合偏硼酸鈉/Sodium metaborate tetrahydrateAR,99%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,10555-76-7RT
偏磷酸鈉/二縮原偏磷酸鈉/Sodium metaphosphateCP,93.5%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,10361-03-2RT
三偏磷酸鈉/磷酸三間酯/偏磷酸三鈉/Trisodium trimetaphosphateCP,65%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,7785-84-4RT
原釩酸鈉/正釩酸鈉/釩酸鈉/Sodium orthovanadateCP,45.5%100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,13721-39-6RT
無水磷酸鈉/無水磷酸三鈉/三堿式磷酸鈉/原磷酸三鈉/正磷酸鈉/磷酸鈉/TSPCP,98%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,7601-54-9RT
磷鎢酸鈉/十二鎢酸磷酸鈉水合物/十二鎢磷酸鈉/Sodium phosphotungstateAR,86.8%100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,51312-42-6RT
多聚磷酸鈉/三聚磷酸鈉/三磷酸五鈉/三磷酸鈉/磷酸五鈉/三聚磷酸五鈉/多磷酸鈉/STPPCP,56%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,7758-29-4RT
焦硫酸鈉/Sodium pyrosulfateAR,40%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,13870-29-6RT
錫酸鈉/Sodium stannateAR,98%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,12058-66-1RT
鎢酸鈉/鎢酸鈉二水合物/正鎢酸鈉/Sodium tungstate dihydrateAR,99.5%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,10213-10-2RT
1-萘磷酸鈉鹽/α-萘磷酸鈉/1-萘酚磷酸單鈉鹽/1-磷酸萘基酯單鈉鹽單水合物/1-Naphthyl phsophoric acid sodium saltBR,98%5克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,81012-89-72~8℃
2-萘磷酸鈉鹽/2-萘磷酸單鈉鹽/β-萘磷酸鈉/2-萘基磷酸鈉/2-萘基磷酸一鈉鹽/2-Naphthyl phosphate sodium saltBR,98%1克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,14463-68-4保存:-20℃
酒石酸氫鈉/重酒石酸鈉/酸性酒石酸鈉/2,3-二羥基-[R-(R*,R*)]-丁二酸單鈉鹽/一水酒石酸氫鈉/Sodium bitartrate monohydrateAR,99%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,526-94-3或6131-98-2RT
改良安卡拉痘苗病毒PCR檢測試劑盒5-Bromo-2-nitropyridine 質量規格:辣椒堿含量HPLC≥98%,標準品
Trimethylsilyl trifluoromethanesulfonate 質量規格:辣椒總堿>98%,辣椒單堿>55%
2-Hydroxypropyl methacrylate 質量規格:>99%
5-BROMO-4-CHLORO-3-INDOLYL PHOSPHATE DISODIUM SALT 質量規格:HPLC≥98%,標準品
CADMIUM BROMIDE TETRAHYDRATE 質量規格:HPLC≥95.50%,標準品
Thiophosphoric acid O,O-diethyl S-benzyl ester 質量規格:HPLC≥98%,標準品
Rhodium(II) trifluoroacetate dimer 質量規格:HPLC≥98%,標準品
3,4-Dimethylaniline 質量規格:HPLC≥99%,標準品
注意事項:
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
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