傳代培養(yǎng)操作步驟：

一、貼壁培養(yǎng)

細胞傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

（1）傳代前在倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)和生長密度，當細胞生長密度達到80%~90%時，即可進行傳代。

（2）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)液。加入PBS清洗1~2次，左右輕輕搖晃后棄掉。

（3）根據(jù)培養(yǎng)瓶大小向瓶內(nèi)加入適量含EDTA的，一般應覆蓋整個培養(yǎng)瓶底。

（4）把培養(yǎng)瓶放入37℃ CO2培養(yǎng)箱進行消化，2~5min后拿出放在倒置顯微鏡下進行觀察，當發(fā)現(xiàn)有70%~80%細胞收縮變圓、細胞間隙變大時，再輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細胞脫落，然后立即加入2倍量的培養(yǎng)液中止消化，使用吸頭輕輕吹打，混合均勻，以防消化過度。

（5）吸出所有細胞懸液至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。

（6）棄上清，加入適量培養(yǎng)液重懸細胞，輕輕吹打混勻，使細胞均勻分散。

（7）用吸頭吸取適量細胞懸液，以適宜的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中，補足培養(yǎng)液，搖勻，放置于37℃ CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間，甚至進行細胞凍存。

LS1034人結(jié)腸腺癌細胞

細胞基本屬性：

細胞詳細介紹：

二、懸浮細胞

傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

一般實驗室中懸浮細胞傳代方法分為直接傳代法和離心傳代法（培養(yǎng)液中含有細胞碎片的情況下）。當在顯微鏡下觀察到懸浮細胞已經(jīng)長滿至80%~90%（細胞懸液變黃）時，即可進行傳代。

（1）嚴格進行無菌操作，所用一切試劑及耗材均應無菌，且須在無菌超凈工作臺中紫外照射30min以上，以免細胞發(fā)生污染。

（2）所用培養(yǎng)液必須適宜細胞生存和生長。來源于不同動物種類、組織類型的細胞，對培養(yǎng)液的要求不一樣，必要時可用預實驗的方法選擇適當?shù)呐囵B(yǎng)液。

（3）胎牛血清對于維持細胞生存，促進細胞生長起著關(guān)鍵作用。可根據(jù)文獻或預實驗選擇合適的胎牛血清。一旦確定，就應保持用至實驗完成。

（4）消化細胞時應避免消化時間過短導致消化不收集到的細胞數(shù)量少，或消化時間過長導致細胞成團塊樣絮狀游離，這時的細胞已有損傷或死亡，影響細胞數(shù)量和實驗進度。

（5）細胞離心的時候應避免離心力過小收集的細胞數(shù)量不夠，或離心力過大對細胞產(chǎn)生損傷。離心后的細胞沉淀棄去上清后，應先彈散細胞沉淀，再加入培養(yǎng)液重懸，這樣比直接吹打?qū)毎麚p傷小，可以提高細胞活率。

（6）吹打細胞時應盡量避免細胞的產(chǎn)生，以免損傷細胞，影響細胞狀態(tài)（吹打過程中殘留部分液體在吸頭內(nèi)可以減少氣泡的產(chǎn)生）。

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GAS8： 生長停滯特異性蛋白8抗體 人神經(jīng)母細胞瘤細胞;SH-SY5Y

COLO 320DM(人結(jié)直腸腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 人血管內(nèi)皮細胞生長因子受體3(VEGFR-3)ELISA 試劑盒 IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標記的兔抗雞IgG 0.1ml

GPR135： G蛋白偶聯(lián)受體GPR135蛋白抗體 FGFR2 Others Mouse 小鼠 FGFR2 / CD332 人細胞裂解液 (陽性對照)

人腦血管平滑肌細胞裂解物HBVSMCL 人血管內(nèi)皮細胞生長因子受體2(VEGFR-2)ELISA 試劑盒 IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標記的兔抗雞IgG 0.1ml

Glypican 5： 0脂酰基醇蛋白聚糖-5抗體 大鼠垂體瘤細胞;MMQ 腎上腺皮質(zhì)腺癌細胞，SW-13細胞 Neuro-2a[N2a;Neuro-2a]細胞，小鼠腦神經(jīng)瘤細胞

HSV 1： 神經(jīng)毒性因子ICP34.5(人單皰疹病毒Ⅰ型)抗體 QSG-7701細胞，肝細胞 人結(jié)直腸腺癌上皮細胞,DLD-1細胞 CM-R053大鼠卵巢上皮細胞培養(yǎng)基100mL

ALPI Others Human 人 Alkaline Phosphatase / ALPI 人細胞裂解液 (陽性對照) 大鼠三葉因子2(TFF2)ELISA試劑盒 ASMA  大鼠抗平滑肌抗體 人視網(wǎng)膜色素上皮細胞HRPEpiC

P3X63Ag8.653小鼠骨髓瘤細胞 Mouse myeloma cell line P3X63Ag8.653 RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS 大鼠三葉因子1(TFF1)ELISA試劑盒 NF-KapB p65  大鼠核因子κB亞基p65親和肽 96T

NPAS3： 神經(jīng)細胞PAS結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體 CSF2RA Others Human 人 GM-CSFR 人細胞裂解液 (陽性對照)

CM-R092大鼠關(guān)節(jié)軟骨細胞培養(yǎng)基100mL 大鼠三0酸腺苷(ATP)ELISA試劑盒 ADAM8(Mouse A Disintegrin And Metalloprotease 8)  小鼠解整合素樣金屬蛋白酶8 96T

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CSF1 Protein Mouse 重組小鼠 M-CSF / CSF-1 蛋白 人B-淋巴細胞趨化因子1(BLC-1/CXCL13)ELISA 試劑盒 XIAP(X-linked Inhibitor of Apoptosis Protein) X-連鎖凋亡蛋白/性連鎖凋亡抑制蛋白抗原 0.5mg

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