傳代培養(yǎng)操作步驟：

一、貼壁培養(yǎng)

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

（1）傳代前在倒置顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)到80%~90%時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（2）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)液。加入PBS清洗1~2次，左右輕輕搖晃后棄掉。

（3）根據(jù)培養(yǎng)瓶大小向瓶?jī)?nèi)加入適量含EDTA的，一般應(yīng)覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底。

（4）把培養(yǎng)瓶放入37℃ CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，2~5min后拿出放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀(guān)察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)有70%~80%細(xì)胞收縮變圓、細(xì)胞間隙變大時(shí)，再輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落，然后立即加入2倍量的培養(yǎng)液中止消化，使用吸頭輕輕吹打，混合均勻，以防消化過(guò)度。

（5）吸出所有細(xì)胞懸液至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。

（6）棄上清，加入適量培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，輕輕吹打混勻，使細(xì)胞均勻分散。

（7）用吸頭吸取適量細(xì)胞懸液，以適宜的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)足培養(yǎng)液，搖勻，放置于37℃ CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間，甚至進(jìn)行細(xì)胞凍存。

NCI-H3255人肺癌細(xì)胞

細(xì)胞基本屬性：

細(xì)胞詳細(xì)介紹：

二、懸浮細(xì)胞

傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

一般實(shí)驗(yàn)室中懸浮細(xì)胞傳代方法分為直接傳代法和離心傳代法（培養(yǎng)液中含有細(xì)胞碎片的情況下）。當(dāng)在顯微鏡下觀(guān)察到懸浮細(xì)胞已經(jīng)長(zhǎng)滿(mǎn)至80%~90%（細(xì)胞懸液變黃）時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（1）嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作，所用一切試劑及耗材均應(yīng)無(wú)菌，且須在無(wú)菌超凈工作臺(tái)中紫外照射30min以上，以免細(xì)胞發(fā)生污染。

（2）所用培養(yǎng)液必須適宜細(xì)胞生存和生長(zhǎng)。來(lái)源于不同動(dòng)物種類(lèi)、組織類(lèi)型的細(xì)胞，對(duì)培養(yǎng)液的要求不一樣，必要時(shí)可用預(yù)實(shí)驗(yàn)的方法選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液。

（3）胎牛血清對(duì)于維持細(xì)胞生存，促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)起著關(guān)鍵作用。可根據(jù)文獻(xiàn)或預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇合適的胎牛血清。一旦確定，就應(yīng)保持用至實(shí)驗(yàn)完成。

（4）消化細(xì)胞時(shí)應(yīng)避免消化時(shí)間過(guò)短導(dǎo)致消化不收集到的細(xì)胞數(shù)量少，或消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致細(xì)胞成團(tuán)塊樣絮狀游離，這時(shí)的細(xì)胞已有損傷或死亡，影響細(xì)胞數(shù)量和實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。

（5）細(xì)胞離心的時(shí)候應(yīng)避免離心力過(guò)小收集的細(xì)胞數(shù)量不夠，或離心力過(guò)大對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生損傷。離心后的細(xì)胞沉淀?xiàng)壢ド锨搴螅瑧?yīng)先彈散細(xì)胞沉淀，再加入培養(yǎng)液重懸，這樣比直接吹打?qū)?xì)胞損傷小，可以提高細(xì)胞活率。

（6）吹打細(xì)胞時(shí)應(yīng)盡量避免細(xì)胞的產(chǎn)生，以免損傷細(xì)胞，影響細(xì)胞狀態(tài)（吹打過(guò)程中殘留部分液體在吸頭內(nèi)可以減少氣泡的產(chǎn)生）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

HPlEpC-c 人類(lèi)胎盤(pán)細(xì)胞上皮細(xì)胞 500,000cells 食管平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) 豚鼠腸脂肪酸結(jié)合蛋白(iFABP)ELISA試劑盒 Rabbit Anti-dog IgG/PE PE標(biāo)記的兔抗狗IgG 0.1ml

FKBP135： FKBP135蛋白抗體 CM-H128人角膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL

V79(倉(cāng)鼠肺細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 豚鼠腸脂肪酸結(jié)合蛋白(iFABP)ELISA 試劑盒 IgG/Bio 標(biāo)記的驢抗兔IgG 0.1ml

FKBP25： 肽基脯酸異構(gòu)酶酶FKBP25抗體 20. 細(xì)胞系統(tǒng)

人導(dǎo)管癌細(xì)胞;ZR-75-30 豚鼠補(bǔ)體因子B(CFB)ELISA試劑盒 Goat Anti-rabbit IgG/Bio 標(biāo)記的羊抗兔IgG 0.1ml

NCI-H1703(人肺鱗癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 PA317(成纖維細(xì)胞) 大鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子121(VEGF121)ELISA試劑盒 ADM (Rabbit soluble endothelial protein C receptor)  兔子腎上腺髓質(zhì)素 96T

MSH6： 錯(cuò)配修復(fù)蛋白6抗體 牛胚氣管細(xì)胞;EB (NBL-4)

IFNL3 Protein Human 重組人 IFNL3 / IL28B / Ierleukin-28B 蛋白 (His 標(biāo)簽) 大鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2(ACE2)ELISA試劑盒 D-LDH  大鼠D-乳酸脫氫酶 96T

Mammaglobin B： 珠蛋白2抗體 LRRN3 Others Human 人 LRRN3 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

大鼠腦成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 大鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)ELISA試劑盒 VEGFR-2/sFLK-1(Human soluble vascular endothelial growth factor receptor-2)  人可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2 96T

NCI-H3255人肺癌細(xì)胞D407細(xì)胞，人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞 出芽短梗霉 人急性T淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞;I 2.1(CRL-2572) 人(T)ELISA 試劑盒 DAD1 (dopamine D1 receptor) 多巴胺受體-D1抗原 1mg

Hephaestin： 亞鐵氧化酶抗體 COCH Others Human 人 COCH / Cochlin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

水牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;WB-S1 人高香草酸(HVA) ELISA 試劑盒 DRD3 receptor(dopamine D3 receptor) 多巴胺受體-D3抗原 0.5mg

HERC1： 鳥(niǎo)苷酸釋放因子p532蛋白抗體 人膀胱上皮永生化細(xì)胞;SV-HUC-1

NCTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of Sain L](小鼠成纖維 5×106cells/瓶×2 小鼠 AMICA1 / JAML 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 人高鐵血紅蛋白(MHB)ELISA 試劑盒 DRD4 receptor peptide 多巴胺受體-D4抗原 0.5mg