產品名稱 | 規格 | 貨號 |
脫氫抗壞血酸還原酶(DHAR)生化檢測試劑盒 | 100管/96樣 50管/48樣 | EY-01S144 |
測定意義:
DHAR存在于細胞質、線粒體和葉綠體中。DHAR催化GSH還原DHA生成AsA和GSSG,調控細胞AsA/DHA比值,是抗壞血酸-氧化還原循環的關鍵酶。提高植物體內的 DHAR 活性,可提高植物食品中AsA含量,進而提高植物食品的營養品質。
測定原理:
DHAR催化GSH還原DHA生成AsA,通過測定DHA減少速率,計算DHAR活性。
實驗中所需儀器及設備:
研缽、冰、低溫離心機、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、可調式移液器和蒸餾水。
試劑一:液體×1瓶,室溫保存。
試劑二:液體×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×2瓶,-20℃保存。臨用前加入22mL試劑二,現配現用。
試劑四:液體×1支,4℃保存。
1、組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿。16000g,4℃離心20min,取上清置冰上待測。
2、細菌、真菌:按照細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);16000g, 4℃離心20min,取上清液置冰上待測。
3、血清等液體:直接測定。
(1)按照蛋白濃度計算
活性單位定義:25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(Cpr×V樣)÷T
=1608×△÷Cpr
(2)按照樣本質量計算
活性單位定義:25℃中每克組織每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (nmol/min/g鮮重) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=1608×△A÷W
(3)按細胞數量計算
活性單位定義:25℃中每104個細胞每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (nmol/min/104cell) =(△A÷ε÷d×V反總×109)÷(細胞數量×V樣÷V樣總)÷T
=1608×△A ÷細胞數量
(4)按液體體積計算
活性單位定義:25℃中每毫升血清每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (nmol/min/mL) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷V樣÷T
=1608×△A
ε:NADH摩爾消光系數,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光徑,1 cm;V反總:反應體系總體積,1000μL=0.001 L;Cpr:上清液蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;V樣:加入反應體系中上清液體積,100μL=0.1 mL;T:反應時間,1min。
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