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過氧化氫酶(CAT)生化檢測試劑盒

型 號

產品時間2023-11-06

所屬分類氧化與抗氧化系列

報價300

產品描述:過氧化氫酶(CAT)生化檢測試劑盒(鉬酸銨比色法)CAT(EC 1.11.1.6)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,是最主要的H2O2清除酶,在活性氧清除系統中具有重要作用。

產品概述

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產品名稱

規格

貨號

過氧化氫酶(CAT)生化檢測試劑盒(鉬酸銨比色法)

100/48 50/24   

EY-01S148

 

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測定意義:                          

CAT(EC 1.11.1.6)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,是最主要的H2O2清除酶,在活性氧清除系統中具有重要作用。

測定原理:

過氧化氫能氧化MoO42-MoO52-,MoO52-接受氫氧根的電子成鍵,分子間立即脫水縮合,得到穩定的黃色復合物(H2MoO4·XH2O)n405nm處有強烈吸收峰,其吸光值和過氧化氫濃度成線性關系。測定出體系剩余過氧化氫在405nm的吸光值即可反映CAT的催化活性。

需自備的儀器和用品:

酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水





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試劑一:液體×1瓶,室溫保存。

試劑二:液體×1瓶,4℃保存。              

試劑三:粉劑×2瓶,-20℃保存。臨用前加入22mL試劑二,現配現用。

試劑四:液體×1支,4℃保存。


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1、組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿。16000g,4℃離心20min,取上清置冰上待測。

2、細菌、真菌:按照細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);16000g, 4℃離心20min,取上清液置冰上待測。

3、血清等液體:直接測定。


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(1)按照蛋白濃度計算

活性單位定義:25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。

ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(Cpr×V樣)÷T

=1608×△÷Cpr

(2)按照樣本質量計算

活性單位定義:25℃中每克組織每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。

ADH (nmol/min/g鮮重) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=1608×△A÷W

(3)按細胞數量計算

活性單位定義:25℃中每104個細胞每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。

ADH (nmol/min/104cell) =(△A÷ε÷d×V反總×109)÷(細胞數量×V樣÷V樣總)÷T

=1608×△A ÷細胞數量

(4)按液體體積計算

活性單位定義:25℃中每毫升血清每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。

ADH (nmol/min/mL) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷V樣÷T

=1608×△A

ε:NADH摩爾消光系數,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光徑,1 cm;V反總:反應體系總體積,1000μL=0.001 L;Cpr:上清液蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;V樣:加入反應體系中上清液體積,100μL=0.1 mL;T:反應時間,1min。


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